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Codon changes challenge PCR-based gene doping detection
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DOI：10.1038/s41434-025-00569-y.png)
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摘要
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基因/基因组操作技术（基因转移/递送、基因编辑等）日益成熟，其在运动中作为基因兴奋剂非法使用的问题已引起关注。世界反兴奋剂机构（WADA）严格禁止基因兴奋剂，并已发布关于定量实时PCR（qPCR）检测的指南。然而，qPCR的技术特性使得检测新的兴奋剂目标变得困难，且目标上的密码子改变也可能影响检测效率。在此，我们制备了人类促红细胞生成素（hEPO）基因的基因组版本和转基因版本的标准材料，并设计qPCR引物以检查密码子改变对基因兴奋剂检测的影响。我们证实，精心设计的qPCR检测方法确实能够捕获转基因信号，但转基因上的密码子改变会严重削弱检测效率。我们还通过混合hEPO的基因组版本和转基因版本模拟了真实的基因兴奋剂场景，qPCR能够检测野生型但无法检测密码子改变的转基因。作为对此挑战的方法学验证，我们也采用Sanger测序法确认，测序能够轻松捕获基因兴奋剂，即使对于密码子改变的转基因也是如此。本研究证实，密码子改变将挑战基于qPCR的基因兴奋剂检测，并呼吁未来开发基于高通量测序的无偏检测工具。
期刊
IF:
4.5
论文数:
230
被引数:
6.7K
机构
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