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Microcapillary Array-Based High Throughput Screening for Protein Biomanufacturability
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AI
DOI：10.1021/acssynbio.5c00205.png)
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摘要
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基因表达是一个涉及众多相互关联变量的复杂现象，研究这些变量以控制表达在生物工程和生物制造中至关重要。虽然为实现覆盖广阔设计空间的质粒文库而存在的克隆技术，但提供类似规模细胞培养筛选的多重技术仍存在不足。我们引入了一种基于微毛细管阵列的平台，旨在通过荧光报告基因对微型细胞培养物进行高通量、多重筛选。该克隆回收机制与传统技术相比，为建立表型-基因型关联提供了100倍的富集比。我们进行了实验，以阐明三种关键质粒设计特征——启动子、5'非翻译区和氨基酸序列——对蛋白质滴度的影响。我们从转录速率差异广泛的数千个启动子中识别出一个小型启动子集合，该集合可最大化蛋白质滴度。我们确定，由5'非翻译区控制的mRNA半衰期与蛋白质表达相关。通过双报告基因成像，我们演示了对操纵子中多个核糖体结合位点的相对分析。最后，我们讨论了结构蛋白疏水性评分对其表达和细胞生长谱的影响。通过使用质粒构建体文库的多次实验，我们展示了该平台在群体分选、双报告基因操纵子筛选、化学扰动以及利用明场吸光度测量进行细胞生长估算方面的应用。
Keyword:
high-throughput screening
biomanufacturing
proteins
expression constructs
plasmid libraries
protein engineering
期刊
IF:
3.9
论文数:
3.9K
被引数:
1.2W
机构
暂无机构信息
引用论文
Temporal changes in plasma levels and metabolism of ketone bodies by liver and brain after ethanol and/or starvation in C57BL/6J miceC57BL/6J小鼠乙醇和/或饥饿后血浆水平和肝脏和大脑中酮体代谢的时间变化
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