.png){kind=icon}
返回
Multiplex quantification of osteomyelitis pathogens based on bead array
.png){kind=icon}
PRE
AI
DOI：10.1007/s00604-026-08408-6.png)
.png){kind=icon}
原文求助.png){kind=icon}
分享.png){kind=icon}
收藏
摘要
En 中文
骨髓炎的准确诊断受到传统培养法局限性的阻碍，这些方法缺乏快速同时鉴定和定量多种病原体的能力。涉及多种病原体的混合感染常加重临床结局，亟需快速、多重诊断方法。我们开发了一种整合不对称固-液双相PCR与微珠阵列平台的检测方法，命名为ASL-PCR，用于同时鉴定五种常见与骨髓炎相关的病原体：金黄色葡萄球菌（S. aureus）、大肠杆菌（E. coli）、肺炎链球菌（S. pneumoniae）、烟曲霉菌（A. fumigatus）和白念珠菌（C. albicans）。该方法中，液相不对称PCR（aPCR）生成单链扩增产物，实时被引物偶联微珠捕获并在微珠表面延伸。扩增过程中掺入生物素-dCTP，产物用链霉亲和素-藻红蛋白（SA-PE）标记并通过流式细胞术检测。该检测方法具有宽动态范围（2.94×10⁶拷贝/µL至7.53×10⁸拷贝/µL）和高灵敏度，S. pneumoniae、E. coli、S. aureus、C. albicans和A. fumigatus的检测限（LOD）分别为1.84×10⁶拷贝/µL、5.28×10⁶拷贝/µL、1.24×10⁷拷贝/µL、1.22×10⁷拷贝/µL和1.47×10⁷拷贝/µL——足以在扩增后检测临床相关病原体负荷。值得注意的是，该方法表现出优异的特异性，任意两种病原体间的交叉反应低于2.5%。血清中的加标回收实验回收率为88.67%至108.56%，表明该方法即使在复杂生物基质中仍保持高定量准确性。与定量实时PCR（qPCR）比较显示强相关性。综合而言，这些结果支持ASL-PCR检测方法在骨髓炎相关病原体同时检测中的概念验证分析可行性和初步技术性能。
Keyword:
Multiplex detection
Osteomyelitis
Bead array
Flow cytometry