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Multivariate Process Optimization for Fixed-Bed Bioreactor-Based AAV Production Improves Total Batch Yield
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AI
DOI：10.1177/10430342251396547.png)
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摘要
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腺相关病毒载体（AAVs）是基因治疗的潜在工具。然而，将AAV的生产规模扩大以用于临床目的，高效生产高质量载体已被证明具有挑战性。在本研究中，我们使用贴壁HEK-293T细胞瞬时转染，优化了固定床生物反应器中的AAV生产过程。我们基于产量对关键工艺参数进行了系统优化，包括细胞接种密度、转染时的细胞密度以及DNA与细胞比例，从原型批次开始，随后进行了十批次运行。在此过程中，我们将报告基因（增强型绿色荧光蛋白）和治疗基因（赖氨酰氧化酶）包装到AAV9衣壳中，作为我们工艺开发计划的一部分，以应用于未来的现行良好生产规范生产和临床试验申请。在整个实验中，培养基条件、转染过程和机械参数保持一致，同时监测约10天生产过程中的pH值、溶解氧和培养基葡萄糖浓度。我们证明，通过优化这些参数，固定床生物反应器能够支持高达1.6-2.8×10⁶细胞/载体条，最多3×10⁹细胞/m²生物反应器。通过这一多变量优化过程，我们将病毒产量提高了约7.6倍（优化工艺运行的产量范围为5.7-10.4倍）相比原型批次。AAV载体总产量的平均值为2.3×10¹⁴ vg（范围1.1×10¹⁴ vg至4.95×10¹⁴ vg），对应平均每细胞产量为1.4×10⁵ vg/细胞（范围0.85×10⁵-2.46×10⁵ vg/细胞）。总之，我们的研究结果表明，在固定床生物反应器中优化工艺参数为可扩展且成本有效的AAV载体生产提供了有前景的策略。
Keyword:
adeno-associated virus (AAV)
fixed-bed bioreactor
process development
transient transfection
triple plasmid system
genomic titer
期刊
H
IF:
4
论文数:
28
被引数:
0
机构
暂无机构信息
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