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RoCi-a single-step multi-copy integration system based on rolling-circle replication
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AI
DOI：10.1093/nar/gkaf1488.png)
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摘要
En 中文
真菌常被用作同源和异源生产酶和代谢物的细胞工厂。为了获得高产菌株，通常需要插入多个基因拷贝，但这并非易事。因此，我们开发了RoCi方法，一种简单高效的方法，通过滚环复制促进多个直接重复的基因表达盒整合到特定的基因组位点。RoCi可以在不需要基于大肠杆菌的克隆步骤的情况下进行，使其适用于自动化实验。在构巢曲霉中，我们使用RoCi生成了含有多达约70个mRFP拷贝的转化子，并证明多拷贝基因阵列支持至少约150代在固体培养基上高稳定生产mRFP。在液体培养中，我们在1升规模观察到轻微的平均拷贝损失。然而，通过将基因表达盒扩展至由缺陷型启动子调控的选择标记，消除了这种损失。与单拷贝菌株相比，使用RoCi进行细胞工厂构建使特异代谢物虫草素和β-葡糖醛酸酶的生产量增加了约10倍。最后，我们证明RoCi也可应用于其他真菌，如工业常用菌株黑曲霉和米曲霉。
Keyword:
ASPERGILLUS-NIDULANS
FILAMENTOUS FUNGI
GENE-EXPRESSION
SACCHAROMYCES-CEREVISIAE
NUMBER INTEGRATION
DUPLICATION CYCLE
PROTEIN-SYNTHESIS
DNA-REPLICATION
DELTA SEQUENCES
RIBOSOMAL DNA
期刊
IF:
13.1
论文数:
3.6W
被引数:
29.0W
机构
引用论文
A 160-bp Palindrome Is a Rad50·Rad32-Dependent Mitotic Recombination Hotspot in Schizosaccharomyces pombe.png)
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