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Inert splint-driven oligonucleotide assembly
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AI
DOI：10.1093/synbio/ysae019.png)
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摘要
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本研究中，我们介绍了一种新的寡核苷酸片段体外组装方法。与依赖短片段、高纯度寡核苷酸的聚合酶链式组装和连接酶链式组装不同，我们的方法（命名为Splynthesis）采用单管、支架驱动的组装反应。Splynthesis通过连接标准脱盐的contig寡核苷酸（长度约150 nt）实现组装，并借助携带5'和3'阻断修饰的短支架寡核苷酸，以防止脱靶连接和扩增事件。我们展示了Splynthesis方法用于组装一个741-bp的基因片段。我们采用标准分子生物学技术以及Oxford Nanopore长读长测序对组装的聚合酶链式反应产物进行验证，并确认该产物可通过分子手段克隆，同时通过Sanger测序进行验证。该方法适用于合成生物学、定向进化、功能蛋白分析，甚至可能适用于支架介导的连接酶链式反应分析。
Keyword:
gene assembly
gene fragments
oligos
DNA splints
期刊
S
IF:
2.5
论文数:
35
被引数:
470
机构
引用论文
Scalable gene synthesis by selective amplification of DNA pools from high-fidelity microchips.png)
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