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Optimizing Prime Editing in Zebrafish
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DOI：10.1177/25731599251380500.png)
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摘要
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碱基编辑是一种基于规律成簇间隔短回文重复序列（CRISPR）的方法，能够实现精确的遗传修饰，包括错义突变，因此对于构建疾病模型具有重要价值。新型碱基编辑器（PE）变体在斑马鱼中的比较性能仍 largely unexplored。本研究中，我们系统评估了五种PE（PE2、PE6b、PE6c、PEmax和PE7）在斑马鱼中的效率。我们测试了编码这些PE的mRNA与设计用于引入五种错义突变的碱基编辑引导RNA（pegRNA）。在五个位点中的四个位点，多种PE实现了高效编辑。其中，PEmax在引入纯碱基编辑方面效率最高，编辑率可达15.34%。我们发现，阻断pegRNA 3′降解的策略（如epegRNA和使用添加La RNA结合基序的PE）并未改善本研究的实验效果。综合而言，这些发现确立了PEmax作为一种在斑马鱼中引入错义突变的可靠工具。
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