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Proximity Binding Assay for PROTAC Ternary Complex Analysis
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DOI：10.1021/acssensors.5c04944.png)
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摘要
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工程化构建由小分子（如PROTACs或分子胶）桥接两种蛋白质的三元复合物，是实现靶向酶解致病蛋白的前提；然而，在药物发现过程中对这些三元相互作用的综合分析仍然具有挑战性。在此，我们介绍了一种邻近结合测定法，可在生物传感器表面同时测量二元和三元相互作用的动力学。靶蛋白和泛素E3连接酶的底物结合亚基被连接到Y形DNA支架的可移动旋转臂上。Y结构诱导蛋白质间的空间邻近，并将其暴露给流过传感器的PROTAC分析物。PROTAC诱导的三元复合物形成通过荧光能量转移（FRET）测量，而二元相互作用通过荧光猝灭检测。该测定法应用于泛素E3连接酶底物受体cereblon（CRBN）和von Hippel-Lindau（VHL），包括AT1、MZ1、dBETs和ARV-825在内的多种PROTACs，以及BRD2、BRD3、BRD4和BRDT蛋白的两个溴结构域作为靶点。自动化工作流程可在单次运行中使用皮摩尔样品量测量384个实时传感器图。对邻近介导的绑定动力学的见解有望促进具有改进特性的PROTACs和分子胶的开发，用于靶向蛋白降解。
Keyword:
Assays
Degradation
Kinetic parameters
Kinetics
Sensors
targeted protein degradation
PROTAC
molecular glue
ternary complex
kinetics
affinity
avidity
Y-structure
switchSENSE
CRBN
VHL
BRD
BET
期刊
IF:
9.1
论文数:
1.1K
被引数:
2.6W
机构
引用论文
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