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Highly mutagenic continuous evolution in E. coli using a Φ29-based orthogonal replication system
DOI:10.1038/s41587-025-02944-x.png)
摘要
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能够允许靶基因发生超突变而不会导致宿主基因组脱靶诱变的生物体,能够加速基因的新功能或增强功能的持续进化。我们在大肠杆菌中开发并优化了一个正交DNA复制系统,该系统使用来自噬菌体Φ29的组分。最小系统仅需Φ29的两个基因即可维持复制子,且复制子可以在体内高效工程化。我们生成了一种高度致突变的Φ29 DNA聚合酶,其引入突变的频率接近每代每碱基10⁻⁴(即每10代在一个1-kb基因中引入一个突变)。我们的系统稳定运行数百代,并能够实现新基因功能的持续、加速进化。我们证明了四环素抗性基因的快速进化,使其对替加环素的抗性水平高于先前报道的系统中达到的水平。此外,我们在短短3天内使β-内酰胺酶对第三代头孢菌素的活动提升了1,000倍。通过使用易错正交系统,提高了细菌进化的突变率。
Keyword:
Molecular biology
Molecular engineering
Life Sciences
general
Biotechnology
Biomedicine
Agriculture
Biomedical Engineering/Biotechnology
Bioinformatics
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期刊
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41.7
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机构
引用论文
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